Free Web space and hosting from maroc.to
Search the Web

TOXICOLOGIE

Welcome To My Homepage BIOCHIMIE RETETE INFORMATICA LICENTA 2005/2006 URGENTA TOXICOLOGIE FARMACOGNOZIE EVIDENTA TEHNOLOGIE Blog FARMACOLOGIE S.N.V FARMACOLOGIE FARMACIA CLINICA

METODE DE IZOLARE

METODE DE IZOLARE A TOXICI NEVOLATILI ORGANICI
METODA STAS-OTTO-OGIER;METODA GRIFFON LE BETON

OGIER=clasifica toxicii in 5 grupe:toxici gazosi/toxici volatili/toxici minerali/toxici organici-nevolatili/toxici speciali
Grupa a IV-a analitica a toxici organici nevolatili se extrage cu solventi organici in mediu acid,neutru sa alcalin
-aceasta grupa cuprinde majoritatea 90%compusilor naturale(animali sau vegetali)si sintetici(ac.org,derivati barbiturici,sulfamide,lactone,anhidride)=substante cu caracter acid,heterozizi,metilxantine
medicamente de sinteza,alcaloizi,pesticide,aditivi alim.,detergenti,toxine vegetale si animale
-izolarea acestor subst..din diferite produse se realiz prin extragerea cu solventi organici,dupa metode generale sau speciale
-unele substante:nicotina,ac.picric,pot fi izolate si prin antrenarea cu vapori de apa,operatia care este de obicei urmata de extragerea distilatului cu solv.org
-metode de extractie cu solventi se pot clasifica in raport cu:
1-solventul utilizat
a/metoda generala cu alcool acidulat(stas)(ogier)=este prima metoda eficienta de extragere cu solventi organici a fost elaborata de stas, a fost ameliorata de ogier.in prezent se utiliz metoda stas-otto,modificata de ogier si kohn-abrest
b/metoda stas=EXTRACTIA ALCALINA PH=8-9;se bazeaza pe principiul solubilitatii in apa,alcool sau amestec hidroalcoolic,a sarurilor alcaloizilor cu acid tartric sau oxalic si a insolubilitatii lor in solventi organici.Aceste saruri st descompuse cu bicarbonat de Na cand alcaloizii trec in forma bazica,insolubili in apa,dar extractibili
c/metoda stas-otto=otto a ameliorat metoda initiala prin extragere cu eter din lichidul apos acid a toxicilor cu caracter acid si neutru.in acest mod st extrasi ac.org,glicozizi,derivati barbiturici,metilxantine,sulfamide,pesticide,lactone,anhidride,compusi neutrici si o serie de impuritati
d/metoda stas-otto-ogier=se obtine reziduuri impurificate cu proteine,lipide,coloranti,rezine;ogier a recurs la purificarea initiala a filtrant hidroalcoolic acid prin tratarea acestuia cu alcool conc.
2-Metoda griffon le beton=metoda cu Na2SO4(sulfat de sodiu)anhidru=lichide biologice sunt acidulate sau alcalinizate-in raport de natura substantei-apoi tratat cu sulfat de sodiu anhidru pana la obtinerea unei mase pulverulente,care se epuizeaza cu solventi organici;metoda este rapida si utila pt extragerea barbituricilor si a unor alcaloizi
Identificarea derivatilor barbiturici prin metoda verelle=molecula de derivati barbituric formeaza cu cation argint in mediu alcalin un complex Ag:barbituric care fixeaza Rodamina B in solutie apoasa,foarte energic.se obtine sporturi purpurii dupa indepartarea exces de Rodamina B,la un jet de apa curenta
Rv.alcalin-->amestec de KOH 0,5N
          -->acetona
Rv.de revelare-->AgNO3 0,1N
          -->Rodamina B 0,4%in etanol 60%
2-COLINESTERAZA SERICA(pseudocolinesteraza,BuchE)=eliberarea prin hidroliza butirilcolinei ,tiocolina, care reactioneaza cu DTNB, rezultat un compus galben, se citeste Ep fata de martor la landa de la un interval de max 15min de la adaugarea ultimu reactiv
  calcul:unitate (U)de activitate enzimatica : cantitatea de enzima care hidroliz a umol butirilcolina in timp de 1min la T 25'C
  activitatea serica se exprima in U/L=89780E412 valorii normale st cuprinse intre 3000-8000U/L ser

     

CSS

CROMATOGRAFIA este o metoda de separare bazata pe distribuirea componentelor probei intre 2 faze :o faza stationara solida sau lichida/ o faza mobila lichida sau gazoasa care migreaza de a lungul fazei stationare
CSS este deosebita de utila prin rapiditatea,sensibilitatea,capacitatea de separare a componentelor dintr-un amestec. se folosec diferite suporturi in fct de grupa de subst de analizat se utiliz diferite amestecuri de solventi pt migrare,care asigura obtinerea unor Rf cat mai diferentiate
 revelarea (identificarea componentelor izolate) se realizeaza prin examinarea placii in lumina U.V si/sau prin pulverizarea cu diferite Rv indicati pt fiecare subst sau grupe de subst.
-subst.utilizate ca faza stationara pot fi de natura organica (amidon,celuloza,poliamide..)/anorganica (silicagel,AlO..) si poate prez.propr.adsorbante ,alegerea acestora se face tinand seama de propr.subst.ce urmeaza a fi separate
Pregatirea placilor=se utiliz placi de sticla,de anumite dimensiuni pe suprafata se intande o pasta formata din adsorbant ales,un solvent si un liant (subst de natura org.sau anorganica care se amesteca cu faza stationara permite o mare rezistenta mecanica a strat depus pe placa si permite manipularea usoara a placii cat si stabilitatea strat depus la operatii de eluare si pulverizare,EXP amidon,CMC,alcool polivinilic,agar-agar..)
MOD DE LUCRU:pe linia de strat fixata la 2,5-3cm de una din marginile placii se aplica solutia de analizat,devloparea se realiz in vase speciale(bac) ,placa imersandu-se in solvent (2-3mm), durata devloparii fiind fct de viteza de migrare a solventului. localizarea si identificarea componentelor separati se face prin pulverizarea placii cu un Rv.convenabil ales sau in lumina u.v    
    

REACTIVI SI DOZARE

ACID:

acid salicilic : Rv.tinder

Deriv.barbiturici:Rv.pare in mediu perfect anhidru

Paracetamol :Rv. liberman cu clorura ferica

Deriv.purinici: Rv.murexidului

fenilbutazona:R. cu H3PO4 sau HCl+NET 

ALCALIN:

Atropina:R.vitali

Strichnina:Rv.malaquen,bauer

Chinina:R.cu ac.sulfuric--->fluorescenta albastra

pilocarpina:bicromat de potasiu,nitroprusiat

morfina:R. cu clorura ferica si fericianura de potasiu,Rv.denige,cu Rv.de culoare

codeina:cu Rv.laffon

Papaverina: cu Rv.marquis,cu fericianura de K

colchicina:R. cu izoniazida,toate cu Rv.de culoare galben spre masliniu

Fenotiazina:chinina,Rv.forest,rosu-violet violet inchis,Rv.meniu

Imipramina:Rv.forest-forest,-->albastru

izoniazida:R. cu PABA,cu vanilina-->galben

 


pt identificarea alcaloizilor se folosesc Rv.generali care dau precipitare sau coloranti. Reziduu pe sticla de ceas ->evaporare eter ->+cateva pic HCl diluat sau H2SO4 diluat -B.M evaporare la sec -> +3-4 pic din Rv.gen care se impart in : Rv de PRECIPITARE care se impart in 4 grupe :

 

1/IODURI DUBLE :

Rv.Bouchardat (wagner)(sol de iod-iodurat KI.I2):2g I2,2gKI +A.D 100ml ->da coloratie cu toate alcaloizilor cu exceptia cafeina- se pastreaza in sticle brune bine inchise ->p.p brun-roscat

Rv.Dragendorff (iodobismutat de K,K(BiI4)H20) : subnitrat de Bi+A.D+HCl conc.+KI 40% ->p.p amorfe ,rosii-portocaliu,galben cu exceptii nu p.p cu cafeina

Rv.Marme (iodocadmiat de K , K2(CdI4)) : iodura de cadmiu + sol calda de KI+A.D -> p.p alb sau galbui cu exceptie cafeina,atropina cu sol conc.

Rv.Mayer (iodomercuriat de K ,K2(HgI4)) ->p.p alb pana la galben :clorura mercurica +KI+A.D

Rv.Walzer (iodomercuriat de K ) : KI 10% + iodura mercurica solida pana la saturare

2/CLORURI ALE METALELOR GRELE SI SARURI DUBLE :

Clorura de Aur ( sol apoasa de diferite conc. ->p.p galben sau alb 5-10-30-40%)

Clorura de platina 5% :da precipitat de clorplatinat de alcaloizi PlCl4.2HCl.ALC.

Clorura de mercur 5% :p.p alb

Sarea lui Reinecke [Cr(CH3)2(SCN)4.NH4]H2O

3/HETEROPOLIACIZI

dau p.p datorita mase lor moleculare mare

Rv.Bertrand (acid silicotungstic)=sarea de Na + A.D

Rv.Scheibler (acid fosfotungstic) tungstat de Na in A.D + acid fosforic 50%->p.p alb

Rv.Schultze (acid fosfoantimonic) Clorura de stibiu+fosfat acid de Na+A.D ->p.p alb

Rv.Sonnenschein (acid fosfomolibdenic) in lipsa de subst. pura se prepara : o sol. nitrica de molibdat de amoniu cu o sol de fosfat disodic ,p.p galben se filtreaza la trompa de vid ,apoi se dizolva intr-o cant suficienta de NaOH ,sol se incalzeste pe baie de nisip pana la indepartarea completa de amoniac .cu substanta obtinuta se prepara o sol 10% in acid azotic 10%

4/PSEUDOACIZI , AC.ORG. SI ALTI COMPUSI ORGANICI : 

Rv.Hager (ac.picric ,sol saturata 10%) ->p.p galben usor sol la cald [poate adauga la solutia saturata de acid picric in alcool de 95' glicerina in proportie de 5%]

Rv.Knorr :sol.de acid picrolonic cu 2% in alcool(sol.saturata) -> p.p galben sau rosu ,se descompun la cald

 


DOZAREA ACID SALICILIC (21) -Metoda manuelle-

 

ionul salicilic formeaza cu ionul feric un complex violet colorimetrabil ,spectrofotometrabila la landa=540 nm

mod de lucru: pb urinei+Rv.Trinder [(clorura mercurica-asigura deproteinizare probei+A.D -  t' C ; racire -> +azotat feric cristalizat cu A.D si HCl )] agitare, repaus 10 min ca si la scara etalon ,se citeste la landa=540 nm fata de martor  (A.D,Rv)  Fp=C/E , Cx = Fp .Ex ug a.salicilic/ml cu Cx=100-400 ug /pb

DOZAREA PARACETAMOL  - Metoda walberg

paracetamol reactioneaza cu acid azotos rezultand un nitroderivat de culoare galben in mediu bazic alcalin,spectrofotometrabila la landa=430 nm

Rv 1:sol.de azotit de Na 10%

Rv 2:sol.standard paracetamol

Rv 3:sol apoasa de ac.tricloracetic 3%

Rv 4;sol apoasa de NaOH

Mod de lucru:sange se recolteaza in prime 4 ore de la intoxicatiei.Din proba se centrifugheaza serul timp de 10 min pt a separa serul,se pipeteaza in eprubete se adauga Rv 2 si 3 ,pb (ser+Rv 3)se agita se centrifugheaza 5-10 min pana obt. unui supernatant clar .pb (supernatant pb+Rv 1)/standard (supernatant .standard.Rv 1)- agitare ,incubare 10min la 37'C ,racire +Rv 4->se agita se citeste Ep si Es fata de A.D la 430 nm,coloratia este stabila 30 min

mg paracetamol/100 ml ser =Ep/Es.20


DOZAREA SULFAMIDE ANTIBACTERIENE        - R.Bratton-Marshal -               R-NH-SO2-C6H6-NH2

principiu:sulfamide se diazoteaza in mediu acid si apoi se cupleaza cu N-naftiletilendiamina(NED), iar azoderivat format este spectrofotometrat la 550 nm  de culoare roz-rosie spre violet

Mod de lucru:urina+ac.tricloracetic 15%+nitrit de Na 0,1% +1ml sulfamat de amoniu 0,5% +[NED(pb) /+A.D (M)] ->agitare energic ->repaus ->landa=550 nm Cx=(Ep-E martor pb).Ep mg sulfamida/l urina cu Cx=5-30 ug/pb

 


DOZAREA MORFINEI

 

Morfina formeaza cu nitrit de Na in mediu acid,2-nitrozomorfina de culoare galben in mediu acid,si rosu in m.alcalin(amoniacal) ,sensibilitatea reactiei este de 5 ug/ml 

Mod de lucru: pb intr-o palnie de separare+CHCl3+NaHCO3 10%(PH=9) agitare 10min, extract cloroformic se filtreaza capsula se evapora B.M sub 50 'C ->reziduu + HCl 0.1N se aduce intr-o eprubeta +NaNO2 1% ,agitare-> repaus ->+amoniac conc., agitare,repaus 5min->Ex la 470 nm     mg morfina/l


DOZAREA COLCHICINEI :

Reactioneaza cu Rv.Libermann - Bouchardat dand o coloratia galbena stabila ,spectrofotometrabila la 425 nm

Mod de lucru: urina+NaOH 10%(PH=9) + cloroform -filtrare->extract cloroformic

 


DOZAREA CLORDIAZEPOXID : (napoton , librium , elenium)  -Metoda spectrofotometrica Bratton-Marshall-

 

Dervat 2-aminobenzofenonic rezultat prin hidroliza acida la cald este diazotat si cuplat cu NED cu formarea azoderivat roz-violaceu ,colorimetrabil

 


DOZAREA IMIPRAMINA (antideprin)

 

formeaza cu metavanadat de Na 0.2% in mediu de H2SO4 o coloratie albastra,spectrofotometrabil la 620 nm

Mod de lucru:urina se alcalinizeaza cu NaOH 10% PH=8-9 extrage cu cloroform,filtrare ,evaporare la sec +Rv.metavanadat ,se citeste imediat

 


DOZAREA IZONIAZIDA (HIN) -Metoda spectrof.,tehnica Deeb si vitagliano,modificata de Meunier)

 

formeaza cu o solutie alcoolica de P-dimetilaminobenzaldehida o coloratia galben-portocalii si se spectrofot. la o anumita landa fata de martor Cx=Fp(Ep-E mp)

 


DOZAREA PARATION

 

Gruparea nitro din paration este redusa la gruparea amino.aceasta se diazoteaza iar clorura sw diazoniu se cupleaza cu N-naftiletilendiamine (NED), rezultand un azoderivat violet ,colorimetrabil,sensibilitatea metodei este de 0.1 ml paration/m3 aer

Mod de lucru:pb p-nitrofenol/ pb urina +HCl 10% PH=4-5 +eter ->filtrare pe Na2SO4,evaporare la sec +Rv + KOH 10%


DOZAREA ORTO-CREZOL (DNOC)  -Metoda spectrofotometrabila-

este redus cu zinc si HCl la aminoderivat care cu un oxidant -sulfat ceric, bicromat de K- formeaza un derivat chinoniminic de culoare rosie, colorimetrabil ,sensibilitatea metodei este de 5 ug/ml